El pasado viernes 17 de marzo realizamos nuestro webinar, conmemorativo al Día De La Mujer en el cual contamos con la participación de cinco expertas en Cromatografía de Líquidos. En esta sesión nos acompañaron mujeres profesionales que se desarrollan en la ciencia con amplio conocimiento de la técnica de HPLC.
Por parte de Agilent México participaron:
- Alicia G. Soto Ramos; Liquid Chromatography Application Engineer en el Centro de Excelencia México de Agilent Technologies México.
- Elena Armenta, Latin America Product Specialist para la división de Chromatography en Agilent.
- Luz Medina V., Lab Informatics Applications Engineer de Agilent.
Por parte de Guatemala:
- Alma Barrientos, Coordinadora de Control de Calidad en Lancasco
- Rina Barrios, Jefe de Investigación y Desarrollo en Pharmadel Guatemala
Como pregunta de calentamiento discutimos sobre los prin
cipales desafí
os y retos como mujeres en el campo de la ciencia. De la charla podemos concluir que una de las principales dificultades es encontrar ese equilibrio entre los diferentes roles de la mujer (madre, profesional, hija, esposa, e
tc).
Continuamos con las preguntas de nuestros participantes. L
as consultas fueron de distintos temas relacionados con la técnica. En está sección les presentamos un resumen de las preguntas y ampliamos con más información y algunos enlaces que pueden ser de utilidad.
Resumen de Preguntas:
- Implementar un método de análisis de vitaminas. ¿Cómo podemos manejar la limpieza entre las diferentes vitaminas para no crear interferencias?
Las vitaminas pueden analizarse por medio de fase reversa. Debemos recordad que tenemos algunas polares y otras no polares. Te compartimos unas notas de aplicación. Generalmente, usan agua, un buffer con mezcla de un solvente orgánico.
El análisis de vitaminas tanto hidrosolubles como liposolubles es un análisis complejo ya que el analito puede presentar dificultades a la hora de extraerlo. Para tener una mejor guía de como abordar este tipo de análisis te dejamos las siguientes herramientas:
BLOG: 👉
Vitamins & Minerals Analysis
APPLICATION NOTE: 👉 Analysis of Water-Soluble Vitamins on an Agilent InfinityLab Poroshell 120 HILIC-OH5 Column
APPLICATION NOTE: Simultaneous Detection and Quantitation of 14 Water-Soluble Vitamins in a Supplement by LC/MS/MS Triple-Quadrupole
- Implementar análisis de Aminoácidos
Para el caso de los Aminoácidos es una molécula que puede presentar dificultades a la hora de analizarse pues es anfotérica por lo que se puede quedar en el acero inoxidable del equipo. Es importante inactivar el acero por medio de pasivación.
La mejor forma para analizarlos es por fluorescencia o haciendo una derivatización. En Agilent tenemos una solución para el análisis que te compartimos a continuación.
BLOG: 👉🔗Amino Acid Analysis
APPLICATION NOTE: 👉🔗Quantitation of Amino Acids in Soy Flour, Dried Cow’s Milk Powder, and Corn Silage by Triple Quadrupole LC/MS/MS
APPLICATION NOTE: Automation of Sample Derivatization Using the Agilent 1260 Infinity II Prime LC System for Amino Acid Analysis
- Recomendaciones para cambiar de fase reversa a fase normal
Para hacer un cambio de fase reversa a fase normal te dejamos estas recomendaciones.
- Para hacer el cambio hay que retirar la columna y utilizar un volumen muerto.
- Verificar que la línea NO TIENE residuos de sal
- Enjuaga muy bien el sistema con agua de HPLC, luego metanol o acetonitrilo 50:50; luego isopropanol y el solvente de tu fase normal. El tiempo puede variar de unos 30 a 40 min por lavado.
- Recomendación utilizar IPA ya que tiene características que hacen que sea afín a solventes polares y no polares.
- A la hora de regresar a fase reversa hacer el mismo procedimiento de enjuagues con volumen muerto, pero ahora de fases no polares hasta una fase polar.
- Verificar que solvente de fase normal sea compatible con el tipo de sellos de la bomba.
Conoce más sobre este tema en la comunidad Agilent, entrando a los siguientes enlaces: 👉🔗
https://community.agilent.com/technical/lc/w/wiki/3907/normal-phase-seals-and-wear-in-procedure
- Consejos para mejorar la forma de mi pico
Es importante, conocer el método y la muestra. La muestra debe estar completamente disuelta, que la fase móvil sea homogénea, agitada y filtrada. También, revisar el volumen de inyección y la temperatura. El pH puede soportar la columna para confirmar que sea adecuada para el buffer que estamos utilizando.
Adicionalmente, verificar que no estemos saturando nuestra columna o nuestro detector. Para un troubleshooting más detallado te invitamos a descargar la aplicación de Agilent HPLC ADVISOR. Conoce más en el siguiente vídeo:
https://www.youtube.com/watch?v=_DIyDjgkHYU&ab_channel=AgilentTechnologies
- ¿Qué herramientas de software para parámetros cromatográficos como LOD o LOQ con base a normativas cómo ICH O USP?
Agilent cuenta con 3 plataformas de Software. A grandes rasgos todas las plataformas cuentan con herramientas para poder hacer cálculos con base a las farmacopeas. También contamos con reportes inteligentes para hacer cálculos personalizados.
Te invitamos a ver el vídeo How to display custom calculations results in OpenLab CDS: https://www.youtube.com/watch?v=zCQhxY0in00&ab_channel=AgilentTechnologies
- ¿Dejar una columna con 75% de acetonitrilo durante todo un día podría degradarla?
El riesgo que podría presentar para la columna dependerá del tipo de columna que se esté utilizando. El verdadero riesgo es el impacto ambiental ya que el acetonitrilo es un solvente altamente peligroso. Es importante mencionar que si está práctica es imperante realizarla con acetonitrilo utilicemos un flujo bajo 0.1 o 0.3 ml/min para utilizar la menor cantidad de solvente posible.
- ¿Es lo mismo integridad de datos y CFR21?
CFR 21 es el código federal de regulación de FDA para Alimentos y Farmacéuticos y cuenta con varios apartados que especifican diferentes partes. En el apartado 11 específicamente, está enfocado a registros electrónicos, de cómo debe ser su trazabilidad. La diferencia principal es que el CFR21 trata de registros electrónicos mientras que el data integrity es abarca todo tipo de registros. El data integrity es una sección de las buenas prácticas de laboratorio.
En relación con el software, Agilent cuenta con la plataforma OL CDS que cumple con ambas partes. Para tener más información te invitamos a ver nuestro webinar on demand:👉🔗 Actualización de software y cumplimiento con CRF21
- ¿Es una buena práctica el uso de sistemas de circulación para utilizar solventes sin descartarlos?
No se considera una buena práctica de laboratorio, ya que corremos el riesgo de introducir contaminaciones no deseadas de regreso al equipo. La recomendación sería dejar un flujo bajo de 0.1 o 0.3 para la estabilización de los equipos si esto fuera necesario para ahorrar solventes. En el caso de limpieza de columnas dejando toda la noche a este mismo flujo con metanol o acetonitrilo se pueden recuperar.
- En el laboratorio actualmente, no usan precolumnas. ¿Qué beneficios tiene usarlas y con que frecuencia debo cambiarlas?
Si el método cumple con las características de desempeño, mientras se mantenga el sistema estable se puede seguir usando la precolumna. Hay laboratorios con alto flujo que pueden cambiarla.
Es importante monitorear caso por caso para saber si es necesario usar la precolumna según el tiempo de matriz que se tiene.
- Equipo no se usa por más de un año y se sospecha que se quedo 100% buffer en la línea y la preocupación es las sales. RID ¿Cómo hacer la limpieza?
Lo más importante es verificar que no se haya formado un tapón. Lo que está en más riesgo es la celda. Lo primero sería calentar agua grado HPLC a punto de ebullición y hacerla pasar al equipo con el fin de disolver las sales. Es recomendado hacerlo módulo por módulo. El sistema cómo tal no debe superar unos 23 – 25 bares. En el caso del detector, sería el último módulo por realizarse y es importante purgarlo.
- ¿Por qué hay que usar estándar interno y porqué se prepara con solvente las muestras?
El estándar interno funciona como un control adicional al método, es posible usarlo o usar estándar externo según lo que indique el método. Por medio del estándar interno podemos conocer si existió alguna desviación a la hora de la extracción. Se debe agregar desde el blanco, todos los puntos de la curva y todas las muestras. Es importante que sea una molécula que se asemeje a nuestro analito, es recomendado usar la molécula modificada isotópicamente.
Con la parte de los solventes, su principal función es para solubilizar nuestro analito, para poderlo extraer de la matriz y mantenerlo en condiciones estables para que a la hora de analizarlo podamos hacer una buena cuantificación. Es importante siempre usar reactivos y solventes grado HPLC.
- ¿Es posible utilizar la misma columna en determinación de vitaminas y principios activos en alimentos y productos terminados en farmacia?
Es posible, pero debemos ser cautelosos con los cuidados de la columna, lavados, verificara el PH que puede soportar, como se deja la columna empaquetada. La vida de la columna se reduce considerablemente y es algo que se debe tener en consideración.
Es importante establecer métodos adecuados de lavado y limpieza y llevar un registro de inyecciones actualizado para reducir el riesgo de cualquier daño a la columna o riesgos de contaminaciones cruzadas.
Si necesitas apoyo con otras consultas, puedes escribirnos a ane.ponce@inboxsa.com y con gusto te estaremos abocando con la experta para apoyarte.
Te esperamos en la próxima 😊
